Кассіч В.Ю., Уховський В.В., Сосницький О.І., Бібен І.А., Зажарський В.В., Кассіч О.В.

ЕКОЛОГІЧНО БЕЗПЕЧНИЙ ЗАСІБ КОНТРОЛЮ ЕПІДЕМІЧНОЇ СИТУАЦІЇ З ТУБЕРКУЛЬОЗУ ТВАРИН В УКРАЇНІ

---

Про автора:	Кассіч В.Ю., Уховський В.В., Сосницький О.І., Бібен І.А., Зажарський В.В., Кассіч О.В.
Рубрика	БІОЛОГІЯ
Тип статті	Наукова стаття
Анотація	Документи, видані Міністерством екології та природних ресурсів (МЕПР) України, її Департаментом екологічної безпеки та ЄС, визнають тест на гіперчутливість із затримкою (DTHS) - туберкуліновий тест - як основний метод виявлення інфікованих туберкульозом тварин [ 10-12]. В Україні для проведення випробування ДП «Сумська біологічна фабрика» виробляє очищений туберкулін (Очищений білок - ППД) для ссавців, розроблений фахівцями лабораторії туберкульозу в Національному науковому центрі «Інститут експериментальної та клінічної ветеринарної медицини» (ННЦ ІЕКВМ) НААН України, що виготовляється з використанням штаму виробництва М. bovis ІЕКВМ-1. Торгівля тваринами між країнами ЄС здійснюється відповідно до Директиви Ради ЄС 97/12 від 17.03.1997 р., яка передбачає, що туберкулінізація тварин повинна проводитися з використанням PPD або HCSM туберкулінів, які повинні бути зроблені з M. bovis "AN5" «Walle» штами. Тому актуальною сферою досліджень є гармонізація вітчизняних ППД-туберкулінів у відповідності до вимог ЄС. Тому метою даної статті є розробка та впровадження у виробництво екологічно безпечного препарату для алергічного діагностування туберкульозу ссавців, що відповідає зазначеним вимогам ЄС. Першим етапом екологічно безпечного розвитку туберкуліну є відбір штаму виробників збудника туберкульозу. Для цього було проведено адаптацію, вивчення морфологічних, культурних і біологічних властивостей штаму M. bovis Valle, оскільки цей штам, у поєднанні з штамом AN-5, був рекомендований Директивою Ради ЄС 97/12 від 17.03.1997 для виготовлення PPD-туберкуліну ссавців. Для адаптації, селекції та накопичення бактеріальної маси виробничих штамів розроблено живильні середовища Сотона КФ і Сотона-ХБ, на якіх культури M. bovis починають рости раніше на (4,2  1,1) діб і дають більше накопичення бактеріальної маси. Розроблено нові технологічні прийоми виготовлення ППД-туберкуліну з використанням методів мікрофільтрації та ультрацентрифугування, що дозволило отримати активний і специфічний алерген. Для проведення контрольних досліджень препарату розроблено спосіб сенсибілізації дослідних тварин інактивованою культурою M. bovis. Спосіб є специфічним, безпечним для здоров’я тварин і людини, він запобігає поширенню живих мікобактерій у природі. На підставі отриманих результатів можемо зробити наступні висновки: 1) використання виробничого штаму M. bovis Vallee KMIEV-9KM у культивуванні на синтетичній середовищі Sotona KhB дозволяє прискорити ріст і накопичення та підвищити вихід бактеріальної маси мікобактерій на 6,0-7,9 мг на одну пляшку, що дає можливість прискорити технологічний процес і підвищення врожаю туберкуліну до 1,20 mg 0,1 мг / см3; 2) у препараті вихід білка значно збільшується після випадання ТСА на 8,6 g 0,5 г, вихід туберкуліну на 1 л середовища - на 0,7 g 0,1 г, вміст білка - на 0,6 mg 0,1 мг / см3. Препарат виявляється стерильним і високо очищеним; 3) після мікрофільтрації на ультрафільтраційних мембранних фільтрах Sartoclean®CA з діаметром пор 0,20-0,45 мкм і HOMM 150-1000 кДа, препарат містить білкові фракції мікобактерій з молекулярною масою 150-1000 кДа, що мають найвищі показники діагностичної активності і специфічність; 4) розроблений спосіб визначення активності очищеного PPD туберкуліну для ссавців є специфічним і безпечним для здоров'я тварин і людини, запобігає поширенню живих мікобактерій в природі. Визначення туберкулінової активності при вакцинації інактивованою культурою M. bovis Vallee у великої рогатої худоби, морських свинок і тварин, вакцинованих штамами вакцини БЦЖ, однаково ефективні.
Ключові слова	туберкульоз, мікобактерії, ППД-туберкулін, мембранна мікрофильтрація, ультрацентрифугування
Список цитованої літератури	Dymova MA, Alkhovik OI, Cherednichenko AG, Khrapov YeA, Petrenko TI, Filipenko ML. Molekulyarno-geneticheskaya kharakteristika lekarstvenno-ustoychivykh izolyatov Mycobacterium tuberculosis, tsirkuliruyushchikh na territorii Sibiri. Problemy meditsinskoy mikologii. 2015; 17(2): 67–68. [in Russian] Holovko VO, Kassich OV, Kassich VYu, Kolesnikova KYu, Koshelnyk VH.  Vyvchennya vlastyvostey vyrobnychoho shtamu M. bovis Valle KMIEV–9 KM. Visnyk Sumskoho natsionalnoho ahrarnoho universytetu. 2015; 1(36): 106–109. [in Ukrainian] Zavhorodniy AI, Paliy AP, Stehniy BT, Kalashnyk VM. Biolohichni vlastyvosti L-form mikobakteriy, vydilenykh z pat materialu. Veterynarna medytsyna Ukrayiny. 2014; 11: 9–12. [in Ukrainian] Zakon Ukrayiny «Pro protydiyu zakhvoryuvannyu na tuberkulyoz» : za stanom na 01 serp. 2012 r / Verkhovna Rada Ukrayiny. Ofits. vyd. Kyyiv : Parlam. vyd-vo; 2012. 17 s. [in Ukrainian] Kassich VYu, Levchenko AH, Ivchenko VD, Kassich OV, Holovko VO. Alerhichna diahnostyka zoonoziv ta zasoby dlya yiyi provedennya. Visnyk Sumskoho natsionalnoho ahrarnoho universytetu. 2016; 1(40): 164–169. [in Ukrainian] Kassich VYu, Levchenko AH, Baydevlyatov YuA, Rebenko HI, Holovko VO, Kassich OV, Ushkalov VO, Volosyanko OV. Doslidzhennya vplyvu oprominennya na ultrastrukturu ta minlyvist mikobakteriy. Scientific Journal «ScienceRise». 2017; 11(40): 6–14. [in Ukrainian] Bilushko VV, Zavgorodniy AI, Bilushko EV. Development of software for calculating the biological activity of mycobacterial allergens. Journal for veterinary medicine, biotechnology and biosafety. 2015; 1(2): 32–34 Boyko OO, Zazharska NM, Brygadyrenko VV. The influence of the extent of infestation by helminths upon changes in body weight of sheep in Ukraine. Visn Dnipropetr Univ Biol Ecol. 2016; 24(1): 3-7. Cherednichenko AG, Dymova MA, Solodilova OA, Petrenko TI, Prozorov AI, Filipenko ML. Detection and characteristics of rifampicin-resistant isolates of mycobacterium tuberculosis. Bull. Exp. Biol. Med. 2016; 60(5): 659–663. Hawn TR, Day TA, Scriba TJ, Hatherill M, Hanekom WA, Evans TG, Churchyard GJ, Kublin JG, Bekker LG, Self SG. Tuberculosis vaccines and prevention of infection. Microbiology and molecular biology reviews: MMBR. 2014; 78(4): 650–71. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 7th ed. 2012; 1-2: 1187 p. "Provisional CDC Guidelines for the Use and Safety Monitoring of Bedaquiline Fumarate (Sirturo) for the Treatment of Multidrug-Resistant Tuberculosis". Archived from the original on 4 January 2014. Tkachenko AA, Davydenko PO, Zazharskiy VV, Brygadyrenko VV. Biological properties of dissociative L- and other forms of Mycobacterium bovis. Visn Dnipropetr Univ Biol Ecol. 2016; 24(2): 338-46. Zazharska N, Boyko O, Brygadyrenko V. Influence of diet on the productivity and characteristics of goat milk. Indian J Anim Res. 2018; 52(5): 711-7. Zazharskyi VV, Davydenko P, Kulishenko O, Chumak V, Kryvaya A, Biben IA, Tishkina NM, Borovik I, Boyko OO, Brygadyrenko VV. Bactericidal, protistocidal and nematodicidal properties of mixtures of alkyldimethylbenzyl ammonium chloride, didecyldimethyl ammonium chloride, glutaraldehyde and formaldehyde. Regul. Mech Biosyst. 2018; 9(4): 540-5.
Публікація статті	«Світ Медицини та Біології» №2(68), 2019 рік , 220-225 сторінки, код УДК 619:616:98:579.873.21:631.153.7
DOI	10.26724/2079-8334-2019-2-68-220-225